Избранное
ЭБ Нефть
и Газ
Главная
Оглавление
Поиск +
Еще книги ...
Энциклопедия
Помощь
Для просмотра
необходимо:


Книга: Главная » Бах А.Н. Собрание трудов по химии и биохимии
 
djvu / html
 

610 КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ ФЕРМЕНТОВ
лась термометром, опущенным в раствор фермента. По прошествии указанного срока раствор охлаждался под струей воды.
Параллельно с этим приготовлялся раствор окисленной хлорогеновой кислоты следующим образом: 0.08 г хлорогеновой кислоты растворялись в 50 см3 дестиллированной воды, из которой путем кипячения под уменьшенным давлением был удален весь кислород. Брались 10 см3 указанного раствора, смешивались с 8 см3 воды (тоже лишенной кислорода), 2 см3 раствора К3Р04 (3 г на 100 см3 воды) и 0.1 см3 раствора сернокислого железа (окисного) (0.05 г на 100 см3 воды).
Полученный таким образом раствор наливался в колбу Виноградского с диаметром дна 12 см и оставлялся на воздухе при 12-14 .
Через определенные промежутки времени (1/.,часа или 1 час) из колб (которых обычно ставилось сразу несколько штук) брались пробы по 5 сма и смешивались с 10 см3 прокипяченного раствора фермента. К смеси прибавлялись 0.3 см3 0.1 м раствора фосфорной кислоты, в результате чего рН раствора становилось равным 7.75. Смесь вливалась в ампулу, из которой с большой тщательностью удалялся кислород. Ампула запаивалась и выдерживалась в течение 20-24 часов. Затем она вскрывалась, раствор доводился путем прибавления фосфорной кислоты до нейтральной реакции (рН = 7.0), после чего 5 см3 раствора смешивались с 15 см3 раствора крахмала (Кальбаум). К смеси прибавлялся толуол в качестве антисептика и она оставлялась 24 часа при 25 . По истечении указанного срока производилось определение сахара по Бертрану. Параллельное этим велись определения действия непрокипяченного фермента, а также контрольные опыты. Ввиду того что в прямых опытах раствор фермента разбавлялся на одну треть, обычно и непрокипяченный фермент брался в той же концентрации, т. е. две трети 0.1%-ного раствора фермента предварительно смешивались с одной третью объема воды. Так как такой раствор все же очень энергично осахаривал крахмал, то для определений он обычш> разбавлялся еще вдвое или вчетверо. Контрольные опыты велись следую-шим образом: 10 см3 прокипяченного раствора смешивались с 5 см3 фосфорнокислого буфера с тем расчетом, чтобы рН смеси было равно 7.75. Эта смесь или запаивалась в ампулы или оставлялась на воздухе в течение 20-24 часов (в данном случае запаивание в ампулы никак не отражалось на конечном результате). Затем раствор смешивался с раствором крахмала и через сутки в смеси производилось определение сахара. Параллельно с этим ставился другой контрольный опыт, в котором разбавленный на одну треть прокипяченный раствор фермента смешивался с надлежащим количеством раствора крахмала, и в смеси сейчас же производилось определение сахара.
Описанные контрольные опыты дали следующие результаты:
см3 0.1 7V КМп04
Непрокиттячанный раствор фермента, разбавленный на V,..... 122 О
Прокипяченный раствор фермента, до смешивания с раствором
крахмала стоявший 1 сутки при рН=7.75........... 2.8
Смесь прокипяченного фермента и крахмала ........... 26
Таким образом, мы видим, что в отсутствии хлорогеновой кислоты фермент почти не возрождается. Сравнительно высокая цифра контроля (2.8) обусловлена присутствием в препарате фермента и в растворе крахмала некоторого количества сахара.
Результаты, полученные при регенерации фермента хлорогеновой кислотой, сведены в нижеследующей таблице. Верхний ряд этой таблицы выражает в часах то время, которое простоял данный раствор хлорогеновой кислоты в колбе Виноградского до смешивания его с прокипяченным рас-

 

1 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 350 360 370 380 390 400 410 420 430 440 450 460 470 480 490 500 510 520 530 540 550 560 570 580 590 600 610 611 612 613 614 615 616 617 618 619 620 630 640 650 660 670


Общая органическая химия, промышленные технологии - Сборники статей. Справочники