410 ОКИСЛИТЕЛЬНЫЕ ПРОЦЕССЫ В ЖИВЫХ ОРГАНИЗМАХ
нить влияние иода на активацию перекиси водорода пероксидазой при окислении фенолов, поскольку и этот окислительный процесс можно количественно изучать благодаря образованию пурпурогалина из пирогаллола. Задержка активации под влиянием иода в этом случае была бы верным доказательством того, что пероксидаза с ее известными свойствами является смесью различных специфических ферментов.
Опыты были поставлены сначала с водно-спиртным экстрактом из корней хрена, приготовленным описанным ранее способом2. Содержание осаждаемой спиртом пероксидазы в этом экстракте было определено следующим образом: к 100 см3 экстракта прибавлялся 1 л абсолютного спирта; образующийся осадок количественно переводился на взвешенный фильтр, промывался абсолютным спиртом и высушивался при 30 в вакууме над хлористым кальцием. Получено: 0.520 г пероксидазы. Последняя растворялась количественно в 100 см3 воды и 20 см3 этого раствора (соответствующие равному объему исходного экстракта), смешивались с 1 г пирогаллола в 50 см3 воды и 30 см3 1 %-ного раствора перекиси водорода: образующийся пурпурогалин переводился через 24 часа на взвешенный фильтр, промывался 200 см3 воды и высушивался при 105 до постоянного веса. II о л у ч е н о: 0.230 г пурпурогалина. 20 см3 исходного экстракта, обработанные тем же способом пирогаллолом и перекисью водорода, дали 0.227 г пурпурогалина. Из этого определения вытекает, что при применении достаточного количества спирта пероксидаза высаждается количественно, т. е. без потери активирующей способности.
Определение активирующей способности пероксидазы описанным ранее способом3 показало, что 20 см3 экстракта (= 0.104 г твердой пероксидазы) активируют 0.11 г перекиси водорода.
Исследование влияния иода на активирующую способность пероксидазы было поставлено следующим образом: 160 см3 экстракта смешивались с 40 см3 раствора иода; через определенные промежутки времени к порциям по 25 см3 этой смеси прибавлялся пирогаллол (1 г в 45 см3 воды) и перекись водорода (30 см3 1 %-ного раствора); образующийся пурпурогалин взвешивался. Для приготовления раствора иода навеска химически чистого иода растворялась в свежеперегнанном спирте. Были поставлены три серии опытов, с возрастающими количествами иода и одинаковыми количествами пероксидазы, причем для каждой серии ставились контрольные опыты с соответственным количеством иода в отсутствии пероксидазы и с 20 см3 экстракта без прибавления иода. Предварительными опытами было установлено, что перекись водорода активируется при окислении пирогаллола свободным иодом так же, как пероксидазой,- в этом случае из пирогаллола образуется пурпурогалин, содержащий иод .
Результаты этих трех серий опытов сведены в таблице на стр. 411.
Применять большие количества иода нельзя было, так как его действие перекрыло бы действие пероксидазы. Из приведенных выше данных следует, что:
1. При применении 0.0075 г иода на 20 см3 экстракта активирующая способность пероксидазы остается без изменения в течение первых часов, а затем начинает медленно возрастать. Избыток пурпурогалина составлял после 200 часов действия иода 0.069 г, т. е. 30.1% количества пурпурогалина, которое получалось в начале опыта.
Пурпурогалин характеризовался окрашиванием в синий цвет в присутствии щелочей, растворимостью в концентрированной серной кислоте с оранжево-красной окраской и образованием нафталина при перегонке с цинковой пылью. Остаток после перегонки содержал иод в виде йодистого цинка. Последний экстрагировался горячей водой; к отфильтрованной жидкости, подкисленной уксусной кислотой после охлаждения, прибавлялась перекись водорода в присутствии крахмального клейстера. Смесь немедленно окрашивалась в синий цвет.