350 ОКИСЛИТЕЛЬНЫЕ ПРОЦЕССЫ В ЖИВЫХ ОРГАНИЗМАХ
Согласно взглядам Шенбейна, активирование перекиси водорода и каталитическое разложение последней нужно приписывать одной и той же причине, ибо, по его наблюдениям, оба эти явления всегда протекают вместе. Однако и тогда уже он нашел, что это правило не без исключений. По этому поводу он говорит3: «Как ни странно, дрожжи являются одним из немногих исключении из правила, согласно которому те вещества, которые разлагают перекись водорода, наподобие платины, вызывают также и посинение гваяковой настойки, содержащей перекись».
Взгляды Шенбейна сохранились до последних лет в физиологической химии. Шпицер , пытавшийся определить количественно окислительную способность животных тканей при помощи вызванного ими каталитического разложения перекиси водорода, пришел к выводу, что способность катализировать перекись водорода нужно приписывать тому же самому ферменту, который вызывает синее окрашивание гваяковой настойки в присутствии перекиси водорода. Однако Лепинуа5 нашел, что интенсивность окрашивания в синий цвет различными объектами не пропорциональна выделению кислорода из перекиси водорода. Наконец, Лев6 окончательно доказал, что способность разлагать каталитически перекись водорода принадлежит определенному ферменту - каталазе.
Этим одновременно определяется и индивидуальность фермента, активирующего перекиси. Название пероксидаза было предложено Линоссье 7, который приготовил из гноя путем осаждения спиртом пероксидазу, не содержащую оксидазы. Растительные пероксидазы приготовлялись до настоящего времени путем нагревании смеси оксидаз и пероксидаз до температуры, при которой разрушаются оксидазы (около 70 ). При этой температуре активность пероксидаз несколько понижается, но они не разрушаются. В качестве метода разделения оксидаз и пероксидаз Асо8 рекомендует фракционированное осаждение спиртом, в котором пероксидазы в достаточной мере растворимы, или отравление оксидаз фтористым или кремнефтористым натрием, к которому пероксидазы мало чувствительны.
Ввиду того что многочисленные растения, не дающие реакции на оксидазы, обнаруживают энергичную реакцию на пероксидазу, мы пытались найти такой исходный растительный материал, который позволял бы непосредственно получать пероксидазу. Особенно подходящими оказались тыква и корни хрена.
Первоначально мы приготовляли пероксидазу из тыквы путем осаждения абсолютным спиртом сока, отмытого из измельченного исходного материала, растворения полученного осадка в воде и повторного осаждения спиртом. Однако ввиду того, что сок тыквы содержит много воды, необходимо было прибавлять громадное количество спирта для осаждения пероксидазы; поэтому выходы были чрезвычайно низки. Более удачен нижеследующий способ выделения пероксидазы из корней хрена.
2 кг хрена были тонко измельчены, оставлены на несколько часов для окончательного ферментативного распада глюкозидрв, а затем обрабатывались в течение продолжительного времени (4-5 дней) 80%-ным спиртом, который экстрагирует эфирные масла. Красный спиртовой экстракт сливался, остаток промывался 80%-ным спиртом, отжимался и в заключение подвергался методической экстракции 40%-ным спиртом. Спиртовые вытяжки (около 8 л), дающие очень сильную реакцию на пероксидазу, упаривались в вакууме при 30 и фильтровались; затем к ним прибавлялся спирт до тех пор, пока прибавление его продолжало вызывать помутнение. Белый осадок растворялся в очень небольшом количестве воды, вновь осаждался абсолютным спиртом и высушивался в вакууме.
Таким образом получалась желтовато-белая масса, чрезвычайно рас-